Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cdk2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400111-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cdk2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cdk2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Cdk2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDK2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cdk2: sc-6248
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cdk2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400111-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdk2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400111-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK2 kodiert die Cyclin-abhängige Kinase 2 (Cdk2), eine Serin/Threonin-Kinase, die mit den Cyclinen E und A zusammenwirkt, um den Übergang von G1 nach S sowie den Verlauf der S‑Phase zu koordinieren. Cdk2 verknüpft mitogene Signale mit der Aktivierung von Replikationsursprüngen, der Zentrosomenduplikation und der Kontrolle von Zellzyklus-Checkpoints, indem sie Substrate in der RB‑E2F‑Achse und der DNA-Replikationsmaschinerie phosphoryliert. Ihre Aktivität wird durch CDK-Inhibitoren wie p21 und p27 sowie durch aktivierende Phosphorylierung reguliert, wodurch CDK2 an Antworten auf DNA-Schäden und Replikationsstress gekoppelt ist. Eine dysregulierte CDK2-Signalgebung ist häufig mit proliferativen Phänotypen und einer veränderten Genomstabilität/Genomwartung assoziiert, wie sie in der Krebsbiologie und entsprechenden Modellsystemen beobachtet wird.
Cdk2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDK2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDK2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDK2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDK2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.