Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cdc27 Plasmide Double Nickase (h): sc-400789-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cdc27 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Cdc27 Double Nickase Plasmid (h) e il Cdc27 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CDC27. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cdc27 Antibody (AF3.1): sc-9972
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cdc27 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400789-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdc27 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400789-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **CDC27** codifica Cdc27, una subunità centrale a ripetizioni tetratricopeptidiche (TPR) del complesso promotore dell’anafase/ciclosoma (APC/C), una ligasi E3 dell’ubiquitina che controlla la proteolisi ordinata di regolatori mitotici chiave. Favorendo l’assemblaggio dell’APC/C e le interazioni con i co-attivatori, Cdc27 contribuisce alla transizione tempestiva dalla metafase all’anafase, all’uscita dalla mitosi e al mantenimento della stabilità del genoma attraverso la degradazione regolata di cicline e securina. La funzione di CDC27 è quindi strettamente legata alla progressione del ciclo cellulare, alla segnalazione del checkpoint del fuso e alla proteostasi mediata dall’ubiquitina. Alterazioni dell’attività dell’APC/C e la disregolazione di CDC27 sono state associate a instabilità cromosomica e fenotipi proliferativi studiati nella biologia del cancro e in disturbi correlati del ciclo cellulare.
Cdc27 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDC27 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDC27. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDC27. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDC27 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.