Cdc2 p34 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419582

Visão geral

Cdk1 codifica a quinase dependente de ciclina Cdc2 p34, um fator central da progressão do ciclo celular que controla a entrada em mitose e coordena checkpoints por meio da fosforilação de múltiplos substratos. Em complexo com ciclinas, a CDK1 regula a dinâmica dos centrossomos, a condensação cromossômica, a ruptura do envelope nuclear e a montagem do fuso, integrando sinais das respostas a danos no DNA mediadas por ATM/ATR e de vias de estresse de replicação. Como a atividade de CDK1 restringe a estabilidade genômica e a capacidade proliferativa, a regulação alterada do eixo CDK1–ciclina é frequentemente implicada em fenótipos de hiperproliferação, aneuploidia e reprogramação do ciclo celular associada a tumores. Assim, modelos murinos de Cdk1 são amplamente utilizados para dissecar mecanismos conservados de controle mitótico, fidelidade de checkpoints e transições de replicação para mitose em contextos de desenvolvimento e de relevância para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Cdc2 p34 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Cdk1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Cdk1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Cdk1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Cdc2 p34.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Cdk1 para a investigação da sinalização de Cdc2 p34, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Cdk1 críticos para a função Cdc2 p34
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Cdk1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Cdc2 p34 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Cdc2 p34 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Cdk1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Cdc2 p34 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Cdc2 p34 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Cdk1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Cdk1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.