Cdc2 p34 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419582

Übersicht

Cdk1 kodiert die cyclinabhängige Kinase Cdc2 p34, einen zentralen Motor der Zellzyklusprogression, der den Eintritt in die Mitose steuert und über die Phosphorylierung zahlreicher Substrate Checkpoints koordiniert. Im Komplex mit Cyclinen reguliert CDK1 die Zentrosomendynamik, die Chromosomenkondensation, den Abbau der Kernhülle und den Aufbau des Spindelapparats und integriert dabei Signale aus ATM/ATR-vermittelten DNA-Schadensantworten sowie aus Signalwegen bei Replikationsstress. Da die CDK1-Aktivität die Genomstabilität und die Proliferationsfähigkeit begrenzt, ist eine veränderte Regulation der CDK1–Cyclin-Achse häufig an hyperproliferativen Phänotypen, Aneuploidie und tumorassoziiertem Zellzyklus-Rewiring beteiligt. Mausmodelle für Cdk1 werden daher breit eingesetzt, um konservierte Mechanismen der mitotischen Kontrolle, der Checkpoint-Treue und der Übergänge von der Replikation zur Mitose in Entwicklungs- und krankheitsrelevanten Kontexten zu untersuchen.

Das Cdc2 p34 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cdk1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cdk1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cdk1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Cdc2 p34-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cdk1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Cdc2 p34-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cdk1-Exone abzielen, die für die Cdc2 p34-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cdk1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Cdc2 p34 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Cdc2 p34 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cdk1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Cdc2 p34 HDR-Plasmid (m) und Cdc2 p34 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cdk1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cdk1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.