Plasmide Double Nickase (h) CD89: sc-403014-NIC

FCAR code pour CD89 (FcαRI), un récepteur d’immunoglobulines de la lignée myéloïde qui se lie à l’IgA et s’associe à la chaîne γ des FcR pour transmettre des signaux activateurs ou inhibiteurs selon la configuration du récepteur. L’engagement de CD89 régule la phagocytose, la cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps, l’explosion oxydative, la libération de cytokines et l’expression de gènes inflammatoires via des voies de signalisation médiées par les ITAM impliquant les kinases de la famille Src, SYK, PI3K, ainsi que les cascades NF-κB et MAPK en aval. Ce récepteur est fortement exprimé sur les neutrophiles, les monocytes, les macrophages, les éosinophiles et certains sous-ensembles de cellules dendritiques, modulant les réponses immunitaires muqueuses et systémiques face aux microbes opsonisés et aux complexes immuns. Une dérégulation de la signalisation IgA–CD89 et des modifications de l’expression de FCAR ont été impliquées dans une inflammation induite par les complexes immuns et dans des dysfonctionnements des cellules myéloïdes, pertinents pour la biologie des maladies inflammatoires et auto-immunes.

CD89 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FCAR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FCAR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FCAR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FCAR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.