Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
CD71/TFRC/Transferrin Receptor Double Nickase Plasmid (h): sc-400310-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD71/TFRC/Transferrin Receptor Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD71/TFRC/Transferrin Receptor Double-Nickase-Plasmid (h) und CD71/TFRC/Transferrin Receptor Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TFRC abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD71/TFRC/Transferrin Receptor: sc-32272
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD71/TFRC/Transferrin Receptor Double Nickase Plasmid (h) | sc-400310-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD71/TFRC/Transferrin Receptor Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400310-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TFRC (CD71) kodiert den Transferrinrezeptor, ein Typ-II-Membranglykoprotein, das die clathrinabhängige Endozytose von transferrin-gebundenem Eisen vermittelt und die zelluläre Eisenhomöostase unterstützt. Rezeptortransport und -recycling sind mit der endosomalen Ansäuerung, der Eisenfreisetzung und der Koordination eisenabhängiger Prozesse gekoppelt, darunter die mitochondriale Atmung, die Hämsynthese und die Aktivität der Ribonukleotidreduktase für die DNA-Synthese. Die TFRC-Expression wird streng über das IRE/IRP-System (Iron-Responsive-Element/Iron-Regulatory-Protein) reguliert und korreliert aufgrund des erhöhten Eisenbedarfs häufig mit dem Proliferationszustand. Eine fehlregulierte, TFRC-assoziierte Eisenhandhabung wird u. a. im Kontext von Anämie, Neurodegeneration, Infektionsbiologie und Tumorzellstoffwechsel untersucht, da eine veränderte Eisenaufnahme oxidativen Stress und Wachstumsprogramme beeinflussen kann.
CD71/TFRC/Transferrin Receptor Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TFRC-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TFRC abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TFRC-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TFRC-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.