CD40 Double Nickaseプラスミド (m): sc-423444-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CD40 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CD40ダブルニカースプラスミド（m）およびCD40ダブルニカースプラスミド（m2）は、Cd40を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CD40 抗体 (HM40-3): sc-20010
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CD40 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-423444-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスCd40はCD40をコードしており、CD40はTNF受容体スーパーファミリーに属する分子で、抗原提示細胞をはじめとするさまざまな免疫細胞サブセットに発現しています。CD40はCD40Lとの共刺激的な相互作用を介して情報伝達を担い、適応免疫応答の協調を促します。CD40シグナルはTRAFアダプタータンパク質を介して、カノニカルおよびノンカノニカルNF-κB、MAPK、PI3K経路を活性化し、サイトカイン産生、抗原提示プログラム、細胞生存に関わる意思決定を駆動します。B細胞では、CD40は胚中心形成、クラススイッチ組換え、親和性成熟に寄与し、骨髄系細胞では炎症性活性化やT細胞とのクロストークを調節します。CD40軸の活性が破綻すると、自己免疫や慢性炎症性の表現型、移植に関連する免疫応答、腫瘍免疫微小環境の再構築などに関与することが示されており、機序免疫学研究で頻繁に標的とされています。
CD40 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Cd40 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Cd40内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Cd40の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Cd40が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。