Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CD33 Double Nickase Plasmid (h): sc-401011-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD33 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD33 Double-Nickase-Plasmid (h) und CD33 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CD33 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD33: sc-53199
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD33 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401011-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD33 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401011-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD33 (Siglec-3) ist ein sialinsäurebindendes, immunglobulinähnliches Lektin, das überwiegend auf Zellen der myeloischen Linie exprimiert wird und dort als inhibitorischer Rezeptor wirkt, der die Immunaktivierung dämpft. Über die Signalübertragung mittels immunrezeptor-tyrosinbasiertem inhibitorischem Motiv (ITIM) und die Rekrutierung von Phosphatasen wie SHP-1/2 moduliert CD33 nachgeschaltete Signalwege, die die Zytokinproduktion, die Phagozytose und die Aktivierungsschwellen von Zellen steuern. CD33 ist an der Regulierung der Homöostase der angeborenen Immunität und von Mikroglia-Antworten beteiligt und verknüpft so Glykankennung mit inhibitorischen Signalprogrammen. Eine veränderte CD33-Expression oder -Funktion wurde mit myeloischen Malignomen und neuroinflammatorischen Prozessen in Verbindung gebracht, was CD33 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur Immunregulation und zu krankheitsassoziierten myeloischen Phänotypen macht.
CD33 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CD33-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CD33 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CD33-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CD33-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.