CD274/PD-L1 더블 틈내기효소 플라스미드 (m): sc-425636-NIC

마우스 Cd274는 CD274/PD-L1을 암호화하는데, 이는 I형 막관통 면역 체크포인트 리간드로서 PD-1(PDCD1)에 결합해 T 세포 수용체 신호전달, 사이토카인 생성, 그리고 세포독성 활성을 억제합니다. PD-L1 발현은 IFN-γ와 같은 염증성 자극에 의해 JAK/STAT 신호를 통해 유도되며, 항원 제시와 조직 내 면역 관용을 형성하는 NF-κB 구동 프로그램과도 통합적으로 연계됩니다. 조혈계 및 비조혈계 세포에서 CD274는 말초 관용, 적응면역 항상성, 그리고 효과기 반응과 조절 반응 간의 균형 조절에 기여합니다. PD-L1 발현 조절 이상은 암 모델에서의 면역 회피 및 만성 염증·자가면역 환경에서의 변화된 면역 표현형과 폭넓게 연관되어 있어, Cd274는 면역학 및 종양 미세환경 연구에서 핵심 노드로 간주됩니다.

CD274/PD-L1 더블 니카제 플라스미드(m)는 mouse 세포주 내 Cd274 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 Cd274 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 Cd274의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, Cd274 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.