CD229 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404895-ACT

LY9 codifica o CD229, um imunorreceptor da família SLAM expresso predominantemente em linfócitos, onde modula as interações célula–célula e os limiares de sinalização durante a ativação imune. O CD229 participa de vias imunorregulatórias ligadas à sinalização dos receptores de células T e B, influenciando respostas de citocinas, proliferação e diferenciação por meio de cascatas de sinalização dependentes de adaptadores. Ao moldar a comunicação entre linfócitos no centro germinativo e em nichos imunológicos periféricos, o CD229 contribui para a homeostase e a tolerância imunológicas. A expressão ou a sinalização desregulada de LY9/CD229 tem sido associada a fenótipos imunes alterados e tem sido investigada no contexto da biologia de doenças imunomediadas e hematológicas.

CD229 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LY9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD229 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LY9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LY9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD229. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LY9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD229 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD229 em células tumorais com expressão de LY9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.