CD22 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419539-ACT

O Cd22 de camundongo codifica o CD22, uma lectina do tipo Ig semelhante a Ig, restrita a células B e ligante de ácido siálico, que funciona como um correceptor inibitório do receptor de antígeno de células B (BCR). Por meio de seus motivos ITIM citoplasmáticos, o CD22 recruta fosfatases como a SHP-1 para atenuar a sinalização proximal do BCR, modulando o fluxo de cálcio, a atividade de MAPK e programas transcricionais a jusante que determinam limiares de ativação e tolerância. O CD22 também contribui para a adesão e o tráfego de células B ao reconhecer glicanos sialilados com ligação α2,6, influenciando interações em microambientes linfoides. A desregulação da sinalização e da expressão de CD22 está associada a respostas humorais alteradas e a fenótipos de tolerância imunológica, reforçando sua relevância em estudos de desregulação de células B e mecanismos associados à autoimunidade.

CD22 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cd22 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD22 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cd22 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cd22, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD22. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cd22 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD22 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD22 em células tumorais com expressão de Cd22 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.