CD206/Mannose Receptor/MMR Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421707-ACT

Mrc1 codifica o CD206 (receptor de manose, MMR), um receptor scavenger do tipo lectina C altamente expresso em macrófagos e células dendríticas, que se liga a glicanos contendo manose, fucose e N-acetilglucosamina presentes em patógenos e em glicoproteínas endógenas. O CD206 regula a endocitose e a fagocitose mediadas por receptor, moldando a captação e o processamento de antígenos e contribuindo para a vigilância imune inata e a homeostase tecidual. É frequentemente usado como marcador de polarização de macrófagos alternativamente ativados (tipo M2) e participa de vias associadas à resolução da inflamação, ao remodelamento da matriz extracelular e a respostas fibróticas. Programas de macrófagos associados ao CD206, quando desregulados, são implicados em estudos de doença inflamatória crônica, biologia de infecções, imunologia do microambiente tumoral e remodelamento metabólico de tecidos em modelos murinos.

CD206/Mannose Receptor/MMR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mrc1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD206/Mannose Receptor/MMR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mrc1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mrc1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD206/Mannose Receptor/MMR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mrc1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD206/Mannose Receptor/MMR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD206/Mannose Receptor/MMR em células tumorais com expressão de Mrc1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.