CD20 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416765-ACT

MS4A1 codifica CD20, una proteina di membrana tetraspan espressa prevalentemente sui linfociti B dallo stadio pre‑B fino a quello maturo e coinvolta nella regolazione dell’attivazione, della proliferazione e della differenziazione delle cellule B. CD20 contribuisce all’organizzazione della membrana e agli eventi di segnalazione associati ai flussi di calcio, che modellano le risposte trascrizionali a valle durante l’attivazione guidata dall’antigene. L’alterata espressione di MS4A1 e la segnalazione dipendente da CD20 sono spesso studiate nel contesto della biologia della linea B e della disregolazione immunitaria. In quanto marcatore di superficie strettamente legato all’identità delle cellule B, CD20 è ampiamente utilizzato per analizzare le vie che regolano l’omeostasi delle cellule B e gli stati patogeni delle cellule B.

CD20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MS4A1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MS4A1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MS4A1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD20. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MS4A1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD20 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD20 nelle cellule tumorali con espressione di MS4A1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.