CD137L Double Nickaseプラスミド (h): sc-404974-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CD137L Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CD137Lダブルニカースプラスミド（h）およびCD137Lダブルニカースプラスミド（h2）は、TNFSF9を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CD137L 抗体 (G-10): sc-398933
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CD137L Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404974-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD137L Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404974-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNFSF9は、抗原提示細胞に発現するTNFスーパーファミリー分子であるCD137L（4-1BBリガンド）をコードしており、活性化T細胞およびNK細胞上のCD137（TNFRSF9）と結合して共刺激シグナル伝達を調節します。CD137L–CD137相互作用は免疫シナプス形成を促進し、NF-κBおよびMAPKに関連するシグナル伝達プログラムを介して、サイトカイン産生、増殖、生存を制御します。さらに、CD137陽性リンパ球への順方向シグナルにとどまらず、CD137Lは骨髄系細胞において逆方向シグナルも伝達し、活性化状態、分化、炎症性応答の出力に影響を与えることがあります。TNFSF9/CD137L活性の制御異常は慢性炎症や自己免疫に関与するとされ、腫瘍免疫学の分野でも、免疫環境やチェックポイント経路がCD137L依存性応答を修飾することから、しばしば検討対象となっています。
CD137L ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TNFSF9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TNFSF9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TNFSF9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TNFSF9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。