CD130/gp130 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400301-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CD130/gp130 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CD130/gp130ダブルニカースプラスミド（h）およびCD130/gp130ダブルニカースプラスミド（h2）は、IL6STを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CD130/gp130 抗体 (E-8): sc-376280
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CD130/gp130 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400301-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD130/gp130 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400301-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IL6ST は、IL-6 ファミリーのサイトカイン受容体に共通するシグナル伝達サブユニットである CD130/gp130 をコードしており、リガンド結合を細胞内のキナーゼカスケードへと連結する。受容体複合体が形成されると、gp130 は JAK キナーゼおよび下流の STAT3/STAT1 を活性化し、さらに MAPK/ERK 経路や PI3K–AKT 経路も介して、炎症、分化、生存、急性期応答を制御する転写プログラムを調節し得る。サイトカインシグナル伝達の中枢ノードとして、IL6ST 依存的シグナルの変化は免疫恒常性の破綻と関連し、慢性炎症状態や腫瘍性の STAT3 経路活性化などの文脈で研究されてきた。これらの特性により、gp130 はヒト細胞におけるサイトカイン応答性、転写プログラムの再配線、ならびに経路間クロストークの機構解析で頻繁に標的とされている。
CD130/gp130 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IL6ST 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IL6ST内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IL6STの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IL6STが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。