CCP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410133-ACT

ヒトのAGBL2は、細胞質カルボキシペプチダーゼ2（CCP2）をコードしており、亜鉛依存性の脱グルタミル化酵素として、チューブリンやその他の基質に付加されたポリグルタミン酸側鎖を切り詰め、翻訳後修飾パターンを形成します。グルタミル化のバランスを調節することで、CCP2は微小管の安定性、細胞内輸送、繊毛関連プロセスに影響し、その下流で細胞分裂や細胞骨格リモデリングにも作用します。チューブリンのグルタミル化異常は、有糸分裂の忠実性や神経機能の障害と関連しており、AGBL2の制御破綻は、異常増殖や細胞ストレス応答に関わる文脈で研究されてきました。これらの特徴により、CCP2はヒト細胞における「チューブリンコード」および微小管駆動型シグナル伝達を解析する上で有用な結節点となります。

CCP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AGBL2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CCP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AGBL2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAGBL2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CCP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAGBL2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCCP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAGBL2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCCP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。