CCDC25 Double Nickaseプラスミド (h): sc-408656-NIC

ヒトCCDC25は、コイルドコイルドメインを含むタンパク質をコードしており、タンパク質間相互作用の足場形成や、シグナル伝達複合体／構造複合体の空間的配置の組織化に寄与すると考えられています。コイルドコイルタンパク質はしばしば、細胞骨格の制御、膜関連トラフィッキング、細胞極性の協調に関与することから、CCDC25も細胞構築や動的リモデリングに影響を及ぼす可能性があります。コイルドコイルネットワークの構成要素における発現変動や機能攪乱は、増殖・遊走・ストレス応答の破綻と関連付けられており、CCDC25はがん生物学および関連病態の機構研究において重要な標的となります。CCDC25の機能を調べることで、コイルドコイル介在性のアセンブリーが、細胞の挙動を形作るシグナル伝達経路と構造経路をどのように統合しているのかを明らかにする手がかりが得られます。

CCDC25 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CCDC25 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CCDC25内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CCDC25の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CCDC25が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。