CCDC23 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-415702-ACT

SVBP codifica a CCDC23, uma proteína que contém domínio coiled-coil implicada em processos associados ao centrossomo e na organização de microtúbulos, com funções descritas na regulação do fuso mitótico e da segregação cromossômica. Por meio dessas funções, a CCDC23 tem potencial para influenciar a progressão do ciclo celular e vias de estabilidade genômica que frequentemente estão alteradas em contextos de doenças proliferativas. A expressão alterada ou a desregulação de fatores centrossomais e associados ao fuso é comumente ligada à aneuploidia e a respostas de estresse celular, tornando SVBP/CCDC23 relevante para estudos mecanísticos em biologia do câncer e modelos relacionados. Sua localização intracelular e características previstas de proteína “scaffold” também sustentam seu uso como ferramenta para investigar redes de interação proteica que governam a mitose e a dinâmica do citoesqueleto.

CCDC23 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SVBP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CCDC23 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SVBP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SVBP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CCDC23. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SVBP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CCDC23 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CCDC23 em células tumorais com expressão de SVBP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.