Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CBS Double Nickase Plasmid (h): sc-400877-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CBS Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CBS Double-Nickase-Plasmid (h) und CBS Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CBS abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CBS: sc-133154
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CBS Double Nickase Plasmid (h) | sc-400877-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CBS Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400877-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die humane CBS (Cystathionin-β-Synthase) ist ein pyridoxalphosphatabhängiges Enzym, das den ersten festgelegten Schritt des Transsulfurierungswegs katalysiert, indem es Homocystein und Serin zu Cystathionin umsetzt und so den Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel mit der Biosynthese von Cystein und Glutathion verknüpft. Durch die Regulation des Homocysteinabbaus und der Redox-Pufferkapazität beeinflusst CBS das Methylierungspotenzial, Reaktionen auf oxidativen Stress sowie den allgemeinen Stoffwechsel schwefelhaltiger Aminosäuren. Die CBS-Aktivität trägt zudem zur endogenen Produktion von Schwefelwasserstoff (H₂S) bei, einem Signalmolekül, das mit mitochondrialer Funktion und zellulärer Stressadaptation in Zusammenhang gebracht wird. Eine Fehlregulation von CBS ist mit einer veränderten Homocystein-Homöostase assoziiert und wurde in Kontexten untersucht, darunter angeborene Stoffwechselstörungen sowie neurovaskuläre und inflammatorische Phänotypen, die für die Grundlagenforschung relevant sind.
CBS Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CBS-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CBS abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CBS-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CBS-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.