caveolin-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400569-ACT

O gene humano **CAV3** codifica a caveolina-3, um componente estrutural das cavéolas enriquecido em músculo, que organiza microdomínios de membrana e atua como plataforma de ancoragem para proteínas de sinalização no sarcolema. A caveolina-3 influencia a mecanotransdução, a homeostase lipídica e vias associadas a receptores ao modular a compartimentalização de canais iônicos e quinases envolvidas na excitabilidade e no metabolismo musculares. Alterações na expressão de **CAV3** ou na arquitetura caveolar estão associadas à disfunção do músculo esquelético e cardíaco, incluindo formas de distrofia muscular e cardiomiopatia, reforçando sua relevância para a estabilidade das fibras musculares e para respostas ao estresse. Essas propriedades tornam a caveolina-3 um ponto de partida útil para estudar tráfego de membrana, transdução de sinal e diferenciação de células musculares em sistemas modelo humanos.

caveolin-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CAV3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

caveolin-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CAV3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CAV3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de caveolin-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CAV3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de caveolin-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via caveolin-3 em células tumorais com expressão de CAV3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.