caveolin-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400102-ACT

ヒトCAV1はカベオリン-1をコードしており、カベオリン-1はカベオラの形成に必須で、形質膜におけるコレステロールに富む脂質ラフトの組織化を担う膜貫通型の足場（スキャフォールド）タンパク質です。カベオリン-1は、受容体型チロシンキナーゼ、GPCRシグナル、インテグリン依存性接着を調節し、さらにPI3K–AKT、MAPK、eNOS/NOシグナルなどの下流経路に影響を与えることで、シグナル伝達と膜輸送を統合的に制御します。エンドサイトーシス、メカノトランスダクション、細胞骨格リモデリングにおける役割を通じて、CAV1は多くの細胞種で増殖、遊走、代謝恒常性に影響します。カベオリン-1の発現変化やカベオラ動態の異常は、がん、線維化、心血管機能障害、インスリン抵抗性と関連づけられており、疾患関連モデルで経路を解析するうえで有用なノードとなります。

caveolin-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CAV1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

caveolin-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CAV1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCAV1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性caveolin-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCAV1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcaveolin-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCAV1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcaveolin-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。