CatSper CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403796

概要

CATSPER1は、精子特異的イオンチャネルであるCatSperのサブユニットをコードしており、過活性化運動を駆動し受精能獲得（カパシテーション）に伴うシグナル伝達を支えるカルシウム流入に必須です。CatSperチャネル活性は、膜電位の変化と細胞内Ca2+動態の変化を統合し、鞭毛の拍動パターンおよび受精に不可欠な下流のリン酸化イベントを制御します。CATSPER1の機能障害は精子機能の低下と関連し、男性不妊の表現型と結び付けられていることから、精子運動制御の機構研究における重要な標的となっています。さらに、複数サブユニットからなるチャネル複合体の構成要素として、CatSper1は精子イオンチャネルの組み立て、輸送、制御機構を解析するための足がかりにもなります。

CatSper CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCATSPER1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CATSPER1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CATSPER1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CatSperタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CatSperシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CATSPER1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CatSperの機能に不可欠なCATSPER1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CATSPER1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CatSper CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCatSper CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CATSPER1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CatSper HDRプラスミド（h）および CatSper HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCATSPER1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCATSPER1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。