CARD 9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402214

Panoramica

Il membro 9 della famiglia del dominio di reclutamento delle caspasi (CARD9) è una proteina adattatrice espressa prevalentemente nelle cellule mieloidi che collega i recettori di riconoscimento dei pattern (pattern-recognition receptors) alla segnalazione infiammatoria a valle. Agisce nel complesso CARD9–BCL10–MALT1 promuovendo l’attivazione delle vie NF-κB e MAPK dopo il riconoscimento di componenti fungine e batteriche tramite recettori lectinici di tipo C come Dectin-1, modulando la produzione di citochine e la polarizzazione dell’immunità innata. CARD9 influenza anche le risposte correlate all’inflammasoma e la difesa dell’ospite a livello delle barriere mucosali coordinando programmi effettrici antimicrobici. Le variazioni genetiche o un’alterata segnalazione di CARD9 sono state associate alla suscettibilità alle infezioni fungine invasive e a fenotipi infiammatori, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico nella ricerca in immunologia e in studi focalizzati sul microbioma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CARD 9 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CARD9 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CARD9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CARD9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CARD 9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CARD9 per lo studio della segnalazione di CARD 9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CARD9 critici per la funzione di CARD 9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CARD9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CARD 9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CARD 9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CARD9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CARD 9 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CARD 9 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CARD9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CARD9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.