CAR1/2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419458

概要

Nr1i3 は、核内受容体である恒常性アンドロスタン受容体（CAR1/2）をコードしており、リガンドによって制御される転写因子として、マウスの肝臓および腸における外因性・内因性化合物の主要なセンサーとして機能します。活性化されると、CAR は RXR とヘテロ二量体を形成し、応答配列に結合して、シトクロム P450 経路、グルクロン酸抱合、胆汁酸の恒常性維持などを含む、第I相／第II相の代謝酵素やトランスポーターの発現を制御します。CAR シグナルは、酸化ストレス応答、脂質およびグルコース代謝、肝細胞増殖プログラムとも交差し、薬物や環境化学物質に対する適応応答を形作ります。Nr1i3 活性の異常は、薬物動態の変化、胆汁うっ滞性障害への感受性、ならびに毒性学や肝疾患モデルに関連する代謝表現型と関連付けられています。

CAR1/2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNr1i3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nr1i3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nr1i3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CAR1/2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CAR1/2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nr1i3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CAR1/2の機能に不可欠なNr1i3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nr1i3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CAR1/2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCAR1/2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nr1i3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CAR1/2 HDRプラスミド（m）および CAR1/2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNr1i3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNr1i3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。