Plásmido CRISPR de Activación (h) CaMKII delta: sc-400811-ACT

CAMK2D codifica la isoforma delta de la proteína quinasa II dependiente de Ca2+/calmodulina (CaMKII delta), una quinasa de serina/treonina que traduce los transitorios de calcio intracelular en salidas de señalización dependientes de la fosforilación. CaMKII delta regula el acoplamiento excitación–contracción, la homeostasis del calcio y programas de transcripción dependientes de la actividad a través de dianas que incluyen canales iónicos, proteínas del retículo sarcoplásmico y efectores posteriores, entre ellos redes asociadas a MAPK y CREB. En tejidos humanos, la actividad de CAMK2D está estrechamente vinculada a la señalización cardíaca y vascular, donde una regulación alterada de CaMKII delta puede remodelar vías de respuesta al estrés, la electrofisiología y la remodelación celular. La señalización del calcio desregulada y los eventos de fosforilación dependientes de CaMKII se han asociado con patología cardiovascular y con defectos más amplios de señalización dependiente de calcio relevantes para estudios mecanísticos de enfermedad.

CaMKII delta El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CAMK2D sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CaMKII delta El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CAMK2D en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CAMK2D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CaMKII delta. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CAMK2D y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CaMKII delta en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CaMKII delta en células tumorales con expresión de CAMK2D silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.