CaM III Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400953

Panoramica

CALM3 codifica la calmodulina III (CaM III), un sensore di Ca2+ altamente conservato che si lega e regola numerose proteine effettrici, tra cui chinasi e fosfatasi dipendenti dalla CaM, canali ionici e componenti del citoscheletro. Traducendo i transienti intracellulari di calcio in cambiamenti dell’attività enzimatica, la CaM III supporta processi fondamentali quali l’accoppiamento eccitazione–contrazione, il traffico vescicolare, la regolazione della trascrizione e la progressione del ciclo cellulare. La segnalazione dipendente da CALM3 interagisce con vie che includono CaMK e calcineurina/NFAT, modulando l’espressione genica in risposta agli stimoli e l’adattamento cellulare allo stress. Una segnalazione del calcio/calmodulina disregolata è stata associata a rimodellamento patologico in ambito cardiovascolare e neurologico, rendendo la perturbazione di CALM3 utile per studi meccanicistici su fenotipi guidati dal Ca2+.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CaM III (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CALM3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CALM3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CALM3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CaM III.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CALM3 per lo studio della segnalazione di CaM III, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CALM3 critici per la funzione di CaM III
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CALM3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CaM III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CaM III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CALM3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CaM III Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CaM III (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CALM3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CALM3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.