CaM III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400953

Übersicht

CALM3 kodiert Calmodulin III (CaM III), einen hochkonservierten Ca2+-Sensor, der zahlreiche Effektorproteine bindet und reguliert, darunter CaM-abhängige Kinasen und Phosphatasen, Ionenkanäle sowie Komponenten des Zytoskeletts. Indem CaM III intrazelluläre Calciumtransienten in Veränderungen der Enzymaktivität übersetzt, unterstützt es zentrale Prozesse wie die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung, den Vesikeltransport, die Transkriptionsregulation und die Zellzyklusprogression. Die CALM3-abhängige Signalübertragung ist mit Signalwegen wie CaMK und Calcineurin/NFAT verknüpft und prägt damit reizabhängige Genexpression sowie die Anpassung an zellulären Stress. Eine fehlregulierte Calcium/Calmodulin-Signalgebung wird mit pathologischen Umbauprozessen im kardiovaskulären und neurologischen Kontext in Verbindung gebracht, wodurch Störungen von CALM3 für mechanistische Studien zu Ca2+-getriebenen Phänotypen nützlich sind.

Das CaM III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CALM3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CALM3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CALM3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CaM III-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CALM3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CaM III-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CALM3-Exone abzielen, die für die CaM III-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CALM3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CaM III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CaM III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CALM3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CaM III HDR-Plasmid (h) und CaM III HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CALM3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CALM3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.