Calpain 6 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407700-NIC

ヒトCAPN6はカルパイン6をコードしており、カルパインファミリーに属する非典型的なメンバーです。主として非プロテアーゼ的に機能し、古典的なカルシウム依存性プロテアーゼというよりは、細胞骨格に関連する調節因子として働きます。カルパイン6は微小管の安定性、アクチンの再構成、細胞運動性に影響を与え、接着ダイナミクスや細胞内輸送に関わるシグナルを統合します。これらの役割を通じて、CAPN6は細胞周期進行の制御経路、分化プログラム、ならびにストレス適応的な細胞骨格リモデリングに関わる経路で研究されています。CAPN6の発現や制御の異常は、腫瘍生物学、血管リモデリング、発生過程に関連する状況で報告されており、遊走や表現型スイッチングの研究におけるメカニズム上の結節点として位置づけられています。

Calpain 6 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CAPN6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CAPN6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CAPN6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CAPN6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。