CA IXCRISPR激活质粒(h): sc-400905-ACT

人类 CA9 基因编码碳酸酐酶 IX（CA IX），这是一种缺氧诱导的膜相关酶，可催化 CO₂ 的可逆水合反应，从而调控细胞外酸化并维持细胞内 pH 稳态。CA IX 有助于细胞适应低氧应激，并与 HIF-1 信号、离子转运网络以及影响细胞存活、迁移和微环境缓冲能力的代谢重编程相互衔接。在实体组织疾病模型中，CA9 表达失调常被用作缺氧、酸化生态位的标志，并与氧化还原平衡改变及与侵袭相关的表型相关联。这些特性使 CA IX 成为研究 pH 依赖性信号传导、缺氧应答转录程序以及微环境驱动选择压力的一个有用节点。

CA IX CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CA9的表达。

CA IX CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CA9基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CA9转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CA IX表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CA9位点，并能够研究内源性位点上依赖于CA IX的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CA9表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CA IX通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。