CA IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419454

概要

マウスのCar4は、炭酸脱水酵素IV（CA IV）をコードしています。CA IVはGPIアンカー型の細胞外酵素で、CO₂の可逆的な水和反応により重炭酸イオン（HCO₃⁻）とプロトン（H⁺）を生成し、局所のpH調節および重炭酸輸送を支えます。イオン輸送過程と機能的に結合することで、CA IVはCO₂/HCO₃⁻恒常性に寄与し、上皮・内皮の生理、ガス交換、ならびに微小環境における酸塩基バランスに影響を与えます。Car4の活性は、肺および腎臓における重炭酸の取り扱いや、pHおよびCO₂レベルの変化に対する組織応答の文脈で一般に研究されています。炭酸脱水酵素依存的な緩衝作用が破綻すると、炎症、低酸素に伴うリモデリング、代謝ストレス経路に関連する過程に影響を及ぼし得ます。

CA IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCar4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Car4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Car4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CA IVタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CA IVシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Car4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CA IVの機能に不可欠なCar4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Car4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CA IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCA IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Car4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CA IV HDRプラスミド（m）および CA IV HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCar4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCar4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。