CA II Plasmide Double Nickase (h): sc-401059-NIC

L’anidrasi carbonica II (CA II), codificata dal gene umano CA2, è un metalloenzima citosolico ad alta attività che catalizza l’idratazione reversibile della CO₂ a bicarbonato e protoni, supportando la regolazione del pH intracellulare e il trasporto di CO₂/bicarbonato. La sua attività è accoppiata ai processi di omeostasi acido-base e al trasporto ionico tramite interazioni funzionali con i trasportatori di bicarbonato e con vie di gestione dei protoni, influenzando la capacità tampone e i flussi metabolici. CA2 è ampiamente espresso ed è spesso utilizzato come marcatore della biologia delle anidrasi carboniche in eritrociti, rene e tipi cellulari rilevanti per il tessuto osseo, dove alterazioni della chimica del bicarbonato possono modificare la fisiologia cellulare. Varianti o cambiamenti dell’espressione di CA2 sono stati associati a disturbi dell’equilibrio acido-base e a fenotipi di mineralizzazione, rendendolo un locus utile per studi meccanicistici sulla segnalazione e sul metabolismo dipendenti dal pH.

CA II Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CA2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CA2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CA2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CA2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.