CA II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401059

Übersicht

Die Carboanhydrase II (CA II), kodiert durch das menschliche Gen **CA2**, ist ein hochaktives zytosolisches Metalloenzym, das die reversible Hydratisierung von CO₂ zu Bicarbonat und Protonen katalysiert und dadurch den intrazellulären pH-Wert, den CO₂-Transport und die Verfügbarkeit von Bicarbonat reguliert. Durch die Kopplung an Bicarbonattransporter und Mechanismen der Protonenhandhabung unterstützt CA II die Säure-Basen-Homöostase in unterschiedlichen Geweben und trägt zu Prozessen wie epithelialem Ionentransport, osteoklastenvermittelter Knochenresorption und dem Gasaustausch in Erythrozyten bei. Die CA2-Aktivität steht zudem im Zusammenhang mit pH-sensitiver metabolischer Regulation und zellulären Stressantworten, wobei veränderte Carboanhydrase-Funktion Signalwege und Enzymaktivitäten nachgeschaltet an die Protonendynamik beeinflussen kann. Genetische und funktionelle Störungen von CA2 wurden mit Erkrankungen der Säure-Basen-Balance und der Mineralisierung in Verbindung gebracht, was CA2 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien pH-abhängiger Physiologie und krankheitsrelevanter zellulärer Phänotypen macht.

Das CA II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CA2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CA2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CA2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CA II-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CA2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CA II-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CA2-Exone abzielen, die für die CA II-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CA2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CA II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CA II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CA2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CA II HDR-Plasmid (h) und CA II HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CA2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CA2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.