CA II CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401059

概要

ヒトCA2遺伝子にコードされる炭酸脱水酵素II（CA II）は、細胞質に存在する高活性の金属酵素であり、CO₂の可逆的な水和反応を触媒して重炭酸イオンとプロトンを生成することで、細胞内pH、CO₂輸送、および重炭酸の利用可能性を調節する。CA IIは、重炭酸輸送体やプロトン制御機構との連関を通じて、多様な組織における酸塩基恒常性を支え、上皮におけるイオン輸送、破骨細胞による骨吸収、赤血球でのガス交換などの過程に寄与する。CA2の活性は、pH感受性の代謝制御や細胞ストレス応答とも交差しており、炭酸脱水酵素機能の変化は、プロトン動態の下流にあるシグナル伝達や酵素活性に影響を及ぼし得る。CA2の遺伝学的・機能的な攪乱は、酸塩基バランスや石灰化の異常に関連する疾患と関連付けられており、pH依存的な生理機能および疾患関連の細胞表現型の機序研究に有用な標的である。

CA II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCA2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CA2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CA2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CA IIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CA IIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CA2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CA IIの機能に不可欠なCA2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CA2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CA II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCA II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CA2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CA II HDRプラスミド（h）および CA II HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCA2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCA2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。