CA I Double Nickaseプラスミド (h): sc-404963-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CA I Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CA Iダブルニカースプラスミド（h）およびCA Iダブルニカースプラスミド（h2）は、CA1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CA I 抗体 (F-5): sc-393490
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CA I Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404963-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CA I Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404963-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトCA1は炭酸脱水酵素I（CA I）をコードしており、CA Iは亜鉛を含む金属酵素として、CO₂の可逆的な水和反応（重炭酸イオンとプロトンへの変換）を触媒します。これにより、細胞内pHの制御、CO₂輸送、ならびに重炭酸依存性の緩衝作用が支えられます。CA I活性は酸塩基恒常性に寄与し、塩化物／重炭酸交換や赤血球におけるガス取扱いを協調するイオン輸送過程とも関わります。炭酸脱水酵素機能が変化すると、細胞のpH調節や酸化還元環境への適応的代謝が乱れ得ます。これらは、血液生理、腎臓および消化管における重炭酸バランス、腫瘍微小環境の酸性化といった文脈でしばしば検討される特徴です。そのためCA1は、pH依存性シグナル伝達、代謝適応、CO₂／重炭酸フラックスを扱う研究において、マーカーおよび機能的ハブとして頻繁に用いられます。
CA I ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。