C9orf169 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406346

Visão geral

CYSRT1 (também anotado como C9orf169) codifica uma pequena proteína com funções emergentes em programas de diferenciação epitelial e na biologia associada à barreira, com enriquecimento relatado em tecidos queratinizantes, como o trato aerodigestivo superior. Embora o seu mecanismo molecular permaneça incompletamente definido, os padrões de expressão e a co-regulação com genes do envelope córneo e da queratinização sugerem envolvimento na diferenciação terminal, nas respostas ao stress celular e na manutenção da homeostase epitelial. A expressão desregulada de CYSRT1/C9orf169 foi observada em múltiplos estudos transcriptómicos de epitélios escamosos, sustentando o seu uso como marcador e como nó funcional em vias ligadas ao equilíbrio entre proliferação e diferenciação. Estas características tornam o CYSRT1/C9orf169 relevante para investigar a biologia epitelial, microambientes inflamatórios e alterações dependentes do contexto associadas à transformação de células escamosas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO C9orf169 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CYSRT1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CYSRT1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CYSRT1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína C9orf169.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CYSRT1 para a investigação da sinalização de C9orf169, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CYSRT1 críticos para a função C9orf169
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CYSRT1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo C9orf169 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo C9orf169 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CYSRT1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo C9orf169 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR C9orf169 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CYSRT1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CYSRT1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.