C1QBP Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419387-LAC

C1qbp codifica la proteina di legame della subunità q del componente 1 del complemento (C1QBP), una proteina mitocondriale multifunzionale che si localizza anche in altri compartimenti cellulari e partecipa alla biogenesi dei ribosomi, al processamento dell’RNA mitocondriale e all’omeostasi della fosforilazione ossidativa. C1QBP sostiene la bioenergetica cellulare e l’adattamento allo stress, collegando la traduzione mitocondriale e la funzione della catena respiratoria a programmi più ampi di segnalazione metabolica e dell’immunità innata. La deregolazione di C1QBP è stata associata, in modelli sperimentali, ad alterazioni della funzione mitocondriale, a risposte infiammatorie e a fenotipi di sopravvivenza cellulare rilevanti per la neurodegenerazione, la disfunzione cardiometabolica e la biologia del cancro. Nei sistemi murini, C1QBP viene spesso studiata nel contesto dell’integrità mitocondriale, della gestione delle ROS e delle vie correlate all’apoptosi.

Le particelle di attivazione lentivirale C1QBP (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di C1qbp in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale C1QBP (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione C1qbp, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di C1QBP. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo C1qbp e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.