c-Myb CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421766

概要

Mybは転写因子c-Mybをコードしており、c-Mybは核内でDNAに結合する制御因子として、造血系をはじめとする前駆細胞コンパートメントにおいて、増殖・生存・系譜決定に必要な遺伝子発現プログラムを制御する。c-Mybは、補因子やクロマチン制御因子と協調して転写ネットワークを編成し、自己複製と成熟に影響するシグナルを統合することで、細胞周期の進行と分化を調節する。MYB活性の破綻は、複数の悪性腫瘍における造血異常や腫瘍性の転写状態と関連づけられており、形質転換機構や分化停止の解析における一般的な研究標的となっている。マウスモデルでは、Mybの改変は、発生タイミング、幹／前駆細胞の維持、ならびに疾患関連表現型を支える転写回路を解明するために広く用いられている。

c-Myb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMyb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Myb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mybのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、c-Mybタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、c-Mybシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Myb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• c-Mybの機能に不可欠なMybエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mybゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• c-Myb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびc-Myb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Myb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  c-Myb HDRプラスミド（m）および c-Myb HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMybホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMyb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。