c-Maf CRISPR Activation Plasmid (m2): sc-421531-ACT-2

Das Mausgen Maf kodiert den Transkriptionsfaktor c-Maf, einen basischen Leucin-Zipper-(bZIP)-Regulator, der an MAF-Erkennungselemente bindet und so kontextabhängige Genexpressionsprogramme steuert. c-Maf integriert Signale aus immunologischen und entwicklungsbiologischen Signalwegen, um zelluläre Differenzierung und Funktion zu modulieren, darunter die Polarisierung von T-Zellen (insbesondere Th2- und Tfh-Programme), Aktivierungszustände von Makrophagen sowie linienspezifische transkriptionelle Netzwerke in Geweben wie der Augenlinse und den Pankreasinseln. Eine dysregulierte c-Maf-Aktivität wurde mit veränderter Immunhomöostase und inflammatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig in Modellen der lymphoiden Transformation sowie metabolischer oder okulärer Funktionsstörungen untersucht. Das Gene Editing von Maf in murinen Zellen oder in Mäusen ermöglicht die mechanistische Analyse von Enhancer-Nutzung, transkriptionellen Schaltkreisen und nachgeschalteten Zytokinen und Linienmarkern, etwa mittels CRISPR-basierter Knockout-, Knock-in- oder regulatorischer Perturbationsansätze in Kombination mit RNA-seq, ChIP-seq und Single-Cell-Profiling.

c-Maf Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m2) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Maf-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

c-Maf Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m2) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Maf-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Maf-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen c-Maf-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Maf-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von c-Maf-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des c-Maf-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Maf-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.