BTG4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408621-ACT

BTG4 (gene de translocação de células B 4) codifica uma proteína antiproliferativa da família BTG/Tob, implicada na regulação do metabolismo de mRNA e de programas transcricionais que moldam a progressão do ciclo celular e a diferenciação. Em células humanas, o BTG4 tem sido associado ao controlo da deadenilação do mRNA materno e à repressão da tradução, ligando a regulação génica pós-transcricional ao timing do desenvolvimento e a transições de destino celular. Por meio de interações com componentes da deadenilase CCR4–NOT e com fatores reguladores de RNA relacionados, o BTG4 pode influenciar a estabilidade global dos transcritos e a produção do proteoma — processos frequentemente perturbados na transformação oncogénica. A atividade alterada da família BTG está associada a desregulação do controlo do crescimento e de vias de resposta ao stress, tornando o BTG4 um nó relevante para estudos mecanísticos de proliferação, diferenciação e turnover de RNA.

BTG4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BTG4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BTG4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BTG4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BTG4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BTG4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BTG4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BTG4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BTG4 em células tumorais com expressão de BTG4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.