BSEP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400742-ACT

ABCB11 codifica a bomba exportadora de sais biliares humana (BSEP), um transportador da família ABC (ATP-binding cassette) localizado na membrana canalicular dos hepatócitos, que medeia o efluxo de ácidos biliares para a bile de forma dependente de ATP. Essa atividade de transporte é central para a homeostase dos ácidos biliares e para a circulação entero-hepática, influenciando o metabolismo hepático de lipídios e processos de desintoxicação. A função de ABCB11 é integrada a vias de detecção de ácidos biliares, incluindo redes transcricionais reguladas por FXR que coordenam a síntese e o transporte de ácidos biliares. A atividade desregulada ou reduzida de BSEP está associada a fenótipos colestáticos e a estresse hepatocelular decorrente do acúmulo intracelular de ácidos biliares, tornando ABCB11 um alvo-chave para o estudo da formação da bile e da sinalização mediada por ácidos biliares.

BSEP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ABCB11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BSEP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ABCB11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ABCB11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BSEP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ABCB11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BSEP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BSEP em células tumorais com expressão de ABCB11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.