BRWD3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-415190-ACT

O gene humano **BRWD3** codifica uma proteína associada à cromatina que contém **bromodomínios** e **repetições WD**, participando da regulação epigenética da transcrição ao acoplar o reconhecimento de **lisina acetilada** à remodelação da cromatina e a processos dependentes de DNA. Por meio de seus bromodomínios e das repetições WD com função de arcabouço, o BRWD3 está implicado no controle de programas de expressão gênica que influenciam a proliferação e a diferenciação celulares, bem como a estabilidade do genoma. Estudos genéticos e funcionais associaram a desregulação de BRWD3 a fenótipos do neurodesenvolvimento, incluindo deficiência intelectual ligada ao X, e a perturbações transcricionais mais amplas relevantes para a biologia do câncer. Assim, o BRWD3 serve como um nó útil para investigar o controle de vias dependentes de cromatina e as relações entre genótipo e fenótipo em células humanas.

BRWD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BRWD3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BRWD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BRWD3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BRWD3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BRWD3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BRWD3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BRWD3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BRWD3 em células tumorais com expressão de BRWD3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.