Plasmide CRISPR/Cas9 KO BRDG1 (m): sc-425307

Présentation

STAP1 (BRDG1) est une protéine adaptatrice exprimée dans les lignées hématopoïétiques et immunitaires, qui coordonne la signalisation intracellulaire en aval des récepteurs de surface. Dans des modèles murins, BRDG1 a été associée à des voies liées au récepteur des cellules B et à une signalisation dépendante des tyrosine kinases, influençant des cascades de phosphorylation et des réponses transcriptionnelles qui façonnent l’activation et la différenciation immunitaires. Grâce à des interactions médiées par des domaines de liaison modulaires, BRDG1 peut agir sur l’intégration des signaux, l’assemblage de complexes protéiques et les programmes d’expression génique en aval. Le dérèglement de réseaux de signalisation pilotés par des protéines adaptatrices est pertinent pour les phénotypes inflammatoires et les mécanismes des maladies hématologiques, faisant de Stap1 une cible utile pour étudier la robustesse de la signalisation immunitaire et le recâblage des voies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BRDG1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Stap1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Stap1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Stap1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BRDG1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Stap1 pour l'étude de la signalisation de BRDG1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Stap1 essentiels à la fonction de BRDG1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Stap1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BRDG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le BRDG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Stap1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BRDG1 plasmide HDR (m) et le BRDG1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Stap1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Stap1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.