BRCA2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400700-LAC

BRCA2 codifica un soppressore tumorale centrale che salvaguarda l’integrità del genoma coordinando la riparazione ad alta fedeltà delle rotture a doppio filamento del DNA tramite ricombinazione omologa. BRCA2 promuove la formazione dei filamenti di RAD51 e regola la protezione delle forcelle di replicazione, collegandosi così alla segnalazione della risposta al danno al DNA, al controllo del checkpoint della fase S e al mantenimento della stabilità cromosomica. L’alterazione o la disregolazione della funzione di BRCA2 è fortemente associata alla suscettibilità ai tumori ereditari e sporadici, a testimonianza del suo ruolo nel prevenire l’accumulo di mutazioni e la ricombinazione aberrante. BRCA2 è quindi ampiamente studiato nelle vie che regolano lo stress replicativo, la riparazione mediata dalla ricombinazione e i fenotipi di mantenimento del genoma rilevanti per la trasformazione oncogenica.

Le particelle di attivazione lentivirale BRCA2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di BRCA2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BRCA2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione BRCA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BRCA2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo BRCA2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.