bradykinin B2 RCRISPR激活质粒(h): sc-401771-ACT

BDKRB2 编码人缓激肽 B2 受体（bradykinin B2 R，B2R），这是一种 G 蛋白偶联受体（GPCR），可结合激肽类分子，从而调控血管张力、内皮通透性、痛觉以及炎症信号传导。受体激活主要通过 Gq/11 和 Gi 偶联通路，促进磷脂酶 C 活化、细胞内 Ca2+ 动员、一氧化氮生成，并进一步启动下游 MAPK/ERK 与 PI3K 信号，从而塑造组织损伤时的快速细胞反应。BDKRB2 介导的信号与激肽释放酶–激肽系统（kallikrein–kinin system）的活性相互交织，并与前列腺素通路及肾素–血管紧张素通路发生串扰，影响血管与炎症稳态。B2 受体活性失调与心血管和炎症相关表型、疼痛信号以及水肿相关过程有关，因此支持在内皮细胞、平滑肌细胞及免疫相关模型中开展机制研究。

bradykinin B2 R CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性BDKRB2的表达。

bradykinin B2 R CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的BDKRB2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于BDKRB2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性bradykinin B2 R表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的BDKRB2位点，并能够研究内源性位点上依赖于bradykinin B2 R的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在BDKRB2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟bradykinin B2 R通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。