BORIS Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403313-NIC

CTCFL codifica BORIS (Brother of the Regulator of Imprinted Sites), um regulador transcricional do tipo cancer-testis relacionado ao CTCF que se liga ao DNA de maneira específica de sequência para influenciar a organização da cromatina e programas de expressão gênica. BORIS participa da regulação epigenética, incluindo o controle de imprinting e a modulação da acessibilidade da cromatina, e pode se articular com processos como isolamento transcricional, comunicação entre enhancer e promotor e redes transcricionais associadas à linhagem germinativa. A expressão aberrante de BORIS tem sido relatada em diversos contextos tumorais e é frequentemente estudada por suas ligações a estados epigenéticos desregulados, circuitos transcricionais alterados e fenótipos de estabilidade genômica. Como um gene humano com expressão normal restrita a tecidos específicos, CTCFL é um modelo útil para investigar mecanismos de controle transcricional dependente de cromatina e reprogramação oncogênica.

BORIS O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CTCFL em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CTCFL. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CTCFL. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CTCFL interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.