BMPR-II Plasmide Double Nickase (h): sc-400895-NIC

BMPR2 codifica il recettore di tipo II per le proteine morfogenetiche dell’osso (BMPR-II), un recettore chinasi a serina/treonina che lega i ligandi BMP e trasduce il segnale attraverso complessi con recettori di tipo I, regolando la fosforilazione canonica di SMAD1/5/8 e vie non canoniche come p38 MAPK. Questa rete di segnalazione coordina programmi trascrizionali che controllano l’omeostasi di endotelio e muscolo liscio, la differenziazione cellulare e il rimodellamento della matrice extracellulare. Un’attività di BMPR-II deregolata è fortemente associata a disfunzione vascolare e a fenotipi di rimodellamento aberrante, e le varianti di BMPR2 sono ampiamente studiate nel contesto dell’ipertensione arteriosa polmonare ereditaria e idiopatica. BMPR2 è inoltre oggetto di studio in biologia dello sviluppo e nelle vie di segnalazione legate alla fibrosi, grazie alla sua posizione centrale nel crosstalk tra le vie BMP/TGF-β.

BMPR-II Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BMPR2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BMPR2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BMPR2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BMPR2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.