BMP-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419346

Übersicht

Bmp7 kodiert das bone morphogenetic protein 7 (BMP-7), einen sezernierten Liganden der TGF-β-Superfamilie, der über BMP-Rezeptoren vom Typ I/II signalisiert, SMAD1/5/9 aktiviert und transkriptionelle Programme koordiniert, die Morphogenese und Gewebehomöostase steuern. Während der Mausentwicklung trägt BMP-7 zur Organogenese und Musterbildung bei, mit besonders wichtigen Funktionen in der Nieren-, Augen- und Skelettentwicklung, und es moduliert zudem epithel–mesenchymale Interaktionen sowie das Remodeling der extrazellulären Matrix. Das BMP-7-abhängige Signalnetzwerk greift in MAPK- und andere kontextabhängige Signalwege ein, um Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation und Differenzierung zu regulieren. Eine fehlregulierte BMP-7-Aktivität ist mit abweichenden Entwicklungsphänotypen sowie veränderten fibrotischen und entzündlichen Antworten verbunden, weshalb Bmp7 ein häufiges Ziel für mechanistische Studien in krankheitsrelevanten Modellen ist.

Das BMP-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Bmp7-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Bmp7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Bmp7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BMP-7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Bmp7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BMP-7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Bmp7-Exone abzielen, die für die BMP-7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Bmp7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BMP-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom BMP-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Bmp7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BMP-7 HDR-Plasmid (m) und BMP-7 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Bmp7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Bmp7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.