beta-catenin CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419477-ACT

Ctnnb1は、カドヘリン依存性の接着結合（アドヘレンスジャンクション）をアクチン細胞骨格につなぐとともに、カノニカルWntシグナル伝達における中心的な転写共活性化因子として機能する、多機能なアルマジロリピートタンパク質であるβ-カテニンをコードしている。Wnt経路が活性化されると、安定化したβ-カテニンが核内に蓄積し、TCF/LEF因子と協調して、増殖、分化、上皮—間葉動態、ならびに幹細胞維持を制御する遺伝子プログラムを調節する。APC/AXIN/GSK3βからなる分解複合体によるβ-カテニンのターンオーバー（分解・更新）の厳密な制御は組織恒常性に必須であり、この制御軸の破綻は腫瘍性シグナルと強く関連する。マウスモデルでは、Ctnnb1の改変は腸、肝臓、皮膚、骨、免疫系コンパートメントにまたがって、発生、再生、疾患関連のシグナルネットワークを解析するために広く用いられている。

beta-catenin CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ctnnb1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

beta-catenin CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ctnnb1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCtnnb1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性beta-cateninの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCtnnb1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるbeta-catenin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCtnnb1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるbeta-catenin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。