beta Actin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418965

Visão geral

Actb codifica a beta-actina de camundongo, uma proteína do citoesqueleto altamente conservada que polimeriza em microfilamentos para sustentar a forma celular, a polaridade e a estabilidade mecânica. A dinâmica da beta-actina impulsiona processos centrais, incluindo citocinese, tráfego vesicular e migração celular, por meio da regulação coordenada da nucleação, ramificação e renovação da actina em vias que envolvem GTPases da família Rho e proteínas ligantes de actina. Além das funções estruturais, o remodelamento da actina influencia programas de transcrição e a transdução de sinais ao modular a mecanotransdução e os pools de actina nuclear. A desregulação da organização da actina está amplamente implicada em modelos experimentais de defeitos do desenvolvimento, reparo de feridas prejudicado, alterações na motilidade de células imunes e invasão de células tumorais, tornando Actb um locus de referência fundamental em estudos de biologia celular e mecanismos de doença.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO beta Actin (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Actb em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Actb, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Actb na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína beta Actin.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Actb para a investigação da sinalização de beta Actin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Actb críticos para a função beta Actin
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Actb para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo beta Actin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo beta Actin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Actb. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo beta Actin Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR beta Actin (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Actb para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Actb definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.