beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3CRISPR激活质粒(m): sc-419239-ACT

Atp1b3 编码 Na⁺/K⁺-ATPase 的 β3 亚基。Na⁺/K⁺-ATPase 是一种异源性 P 型 ATP 酶，负责维持跨膜 Na⁺ 与 K⁺ 梯度，而这些梯度对静息膜电位、渗透平衡以及继发性主动转运至关重要。通过维持离子稳态，ATP1B3 会影响细胞体积调控、上皮转运与兴奋性等过程，并可调节与膜电位及离子依赖性激酶活性相耦联的信号网络。β 亚基还参与泵复合体的正确组装、运输与膜稳定性，从而通过依赖 ATP 的离子转运塑造细胞的能量需求。Na⁺/K⁺-ATPase 功能失调与神经功能障碍、心血管与肾脏生理以及炎症相关表型的模型研究有关，因此 Atp1b3 是小鼠体系中开展机制研究的一个有用节点。

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Atp1b3的表达。

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Atp1b3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Atp1b3转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Atp1b3位点，并能够研究内源性位点上依赖于beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Atp1b3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。