beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β₃-AR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403301-ACT

ADRB3 kodiert den menschlichen β3-adrenergen Rezeptor, einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der bevorzugt die Gs-Signalübertragung nutzt, um die Adenylylcyclase zu stimulieren, cAMP zu erhöhen und PKA-abhängige transkriptionelle und metabolische Programme zu aktivieren. In Adipozyten und anderen metabolisch aktiven Zellen trägt ADRB3 über cAMP/PKA und nachgeschaltete, CREB-vermittelte Genexpression zur Regulation der Lipolyse, thermogener Antworten und des Energieverbrauchs bei; je nach zellulärem Kontext besteht dabei eine Signalweg‑Wechselwirkung mit MAPK‑Pathways. Eine veränderte ADRB3-Expression oder -Signalgebung wurde im Zusammenhang mit Adipositas und Insulinresistenz untersucht, ebenso wie mit breiteren kardiometabolischen Phänotypen, bei denen der adrenerge Tonus den zellulären Stoffwechsel und Stressantworten beeinflusst. Da β3‑AR die Dynamik von Second Messengern und Mechanismen der Rezeptordesensibilisierung moduliert, wird er häufig eingesetzt, um GPCR‑Trafficking, Liganden‑Bias und das Umprogrammieren metabolischer Signalwege zu untersuchen.

beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADRB3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADRB3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADRB3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADRB3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADRB3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.