BECN1/Beclin-1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-425033-NIC

マウスBecn1は、マクロオートファジーの中核的制御因子であるBECN1/Beclin-1をコードする。Beclin-1は、PI3KC3/VPS34複合体の組み立てと、形成初期のファゴフォアにおけるホスファチジルイノシトール3-リン酸（PI3P）の産生を通じて、オートファゴソーム開始を協調的に制御する。さらに、BCL2ファミリータンパク質や複数のオートファジー調節因子と相互作用することで、栄養状態およびストレス応答シグナルを統合し、オルガネラの品質管理、プロテオスタシス、自然免疫応答に影響を及ぼす。これらの経路を介してBECN1は、エンドリソソーム輸送や選択的オートファジーなどの細胞恒常性維持プログラムとオートファジーを結び付けており、神経変性、感染生物学、代謝ストレス、がん関連モデルにおいて頻繁に解析されるプロセスである。

BECN1/Beclin-1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Becn1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Becn1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Becn1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Becn1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。