BCKDE1A Plasmide Double Nickase (h): sc-417950-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BCKDE1A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BCKDE1A Double Nickase Plasmid (h) e il BCKDE1A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BCKDHA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BCKDE1A Antibody (H-5): sc-271538
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BCKDE1A Plasmide Double Nickase (h) | sc-417950-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BCKDE1A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-417950-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BCKDHA codifica la subunità E1α del complesso della deidrogenasi degli α-chetoacidi a catena ramificata (BCKDH), un sistema enzimatico mitocondriale che catalizza la decarbossilazione ossidativa degli α-chetoacidi derivati dagli amminoacidi a catena ramificata. Questa attività è centrale nel catabolismo di valina, leucina e isoleucina e collega il turnover degli amminoacidi alla produzione di acetil-CoA e succinil-CoA, influenzando l’equilibrio redox mitocondriale e il metabolismo energetico. La funzione di BCKDHA è regolata dalla dinamica di fosforilazione del complesso BCKDH e dalla disponibilità di cofattori mitocondriali, integrando il sensing dei nutrienti con il flusso metabolico. L’alterazione di BCKDHA è associata a un metabolismo compromesso degli amminoacidi a catena ramificata e a errori congeniti del metabolismo come la malattia delle urine a sciroppo d’acero, rendendolo rilevante per studi su stress metabolico, disfunzione mitocondriale e segnalazione guidata dagli amminoacidi.
BCKDE1A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BCKDHA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BCKDHA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BCKDHA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BCKDHA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.